الغرض من الاختبار Purpose

التفريق بين الكائنات الحية الدقيقة التي لها القدرة على استعمال الأسيتاميد كمصدر وحيد للكاربون.

مبدأ الاختبار Principle

تنمو على هذا الوسط البكتريا التي لها القدرة على افراز انزیم acylamidase الذي ينزع المجموعة الامينية من acetamide لتحرير الأمونيا مما يؤدي الى زيادة قلوية الوسط فيتغير لونه من الاخضر الى الازرق الغامق المائل الى الارجواني.

الوسط :Media

حضر بإذابة (5 غم ) كلوريد الصوديوم NaCl ، (1غم) فوسفات الأمونيوم ثنائية الهيدروجين  NH4H2PO4  (1غم) فوسفات البوتاسيوم احادية الهيدروجين K2HPO4 ( 0٫8 غم) كاشف البروموثايمول الازرق bromthymol blue (10غم) acetamide ( 15غم) الاكار agar في كمية من الماء المقطر و يعدل الاس الهيدروجيني الى 6,8 ثم يكمل الحجم الى 1000 مل ، ويعقم بجهاز المؤصدة بدرجة 121م وبضغط 15 باوند / انج² لمدة 15 دقيقة ثم وزع في انابيب وتترك لحين تصلبها (ملاحظة يفضل توزيع الوسط في انابيب ثم يعقم).

طريقة العمل Method

1- تحضر مزرعة بكتيرية بعمر 18- 24 ساعة .

2- يلقح الوسط المائل للاسيتامايد acetamide slant بالمزرعة البكتيرية باستعمال ناقل معدني (Loop).

3- تحضن في ظروف هوائيا في درجة حرارة ( 35 - 37 )م لمدة تصل إلى 4 أيام.

النتائج المتوقعة Expected Results

* تغيير لون الوسط الى الازرق يدل على ايجابية الاختبار الشكل ( 1-A )

*عدم تغير لون الوسط يدل على سلبية الاختبار الشكل (1-B)

ملاحظات

1- ظهور النمو بدون تغير لون الوسط قد يشير إلى إيجابية الاختبار .

2- عدم ظهور اللون بعد انتهاء مدة الحضن يفضل اعادة الاختبار وذلك بتقليل كمية اللقاح المستعمل

3- يفضل عدم استعمال مزرعة سائلة وذلك بسبب كثافة النمو مما يؤثر في النتيجة.