(1) المبدأ الاساسي  Basic Principle

تم تقدير فعالية انزيم ALP  باستخدام طريقة انزيمية وذلك من خلال العبوات الجاهزة منت شركة (Biomerieux)  الفرنسية استنادا الى طريقة ((Belfeld & Goldberg ,1971  وهي طريقة لونية تستند على استخدام المادة الاساس (Substrate) التي يعمل عليها انزيم الفوسفاتيز القاعدي (Alkaline Phosphatase) اذ يضاف محلول (Phenyl Phosphate) (المادة الاساس) إلى مصل الدم ويحضن التفاعل لمدة ربع ساعة في درجة (37)ْم فيقوم الانزيم بتحويل المادة الاساس إلى الفينول الذي يمكن الكشف عنه وتقديره كميا وذلك باضافة المحلول (4-amino-anti pyrine) والذي يكون معقدا احمر اللون يعرف بالكينون وهو ذو شدة تتناسب طرديا مع فعالية الانزيم في مصل الدم (Varley, 1967) ويمكن قراءة الامتصاصية لمركب الكينون عند طول موجي قدره (510) نانوميتر باستخدام جهاز المطياف الضوئي .

ويمكن توضيح هذا التفاعل بالمعادلات الآتية :

(2) المحاليل المستخدمة Reagents Used

1. محلول مادة الاساس المنظم Substrate Buffer Solution

يحتوي على المركب (Disodium Phenyl Phosphate) بتركيز (5) ملي مول /لتر مع محلول (Carbonate-Bio Carbonate) بتركيز (50) ملي مول /لتر وفي دالة حامضية (PH = 10) .

2. المحلول القياسي Standard Solution

يحتوي على مركب الفينول بتركيز (20) بوحدة كانيد – كنك .

3. المحلول المثبط Inhibitor Solution

يحتوي على المركب (Potassium Ferricyanide) بتركيز (60) ملي مول / لتر مع المركب (Sodium Arsenate) بتركيز (75) غرام / لتر .

4. المحلول الملون  Color Solution

يحتوي على المركب (4-Amino-Antipyrine) بتركيز (60) ملي مول / لتر.

(3) طريقة العمل Procedure

1. محلول الاختبار Test Solution

يوضع في انبوبة اختبار (2 ) مليلتر من المادة الاساس ثم توضع في حمام مائي بدرجة (37 °C) لمدة (5) دقائق ثم يضاف (50) مايكروليتر من مصل الدم وتعاد الانبوبة إلى الحمام المائي وبدرجة الحرارة نفسها ولمدة (15) دقيقة ، ثم يضاف اليها (0.5) مليليتر من المحلول المثبط وتمزج جيدا ويضاف بعدها (0.5) مليليتر من المحلول الملون .

2. محلول السيطرة Control Solution

يوضع في انبوبة اختبار (2) مليلتر من المادة الاساس ثم توضع في حمام مائي بدرجة (37 °C) لمدة (5) دقائق ، بعدها يضاف (0.5) مليليتر من المحلول المثبط وبعد مزجها جيدا يضاف (0.5) مليليتر من المحلول الملون ثم تمزج بشكل جيد ويضاف (50) مايكروليتر من مصل الدم .

3. المحلول القياسي Standard Solution

يوضع في انبوبة اختبار (2) مليليتر من المادة الاساس ثم توضع في حمام مائي بدرجة (37 °C) لمدة (5) دقائق ، ثم يضاف (50) مايكروليتر من المحلول القياسي وتعاد الانبوبة إلى الحمام المائي وبدرجة الحرارة نفسها ولمدة (15) دقيقة ، ثم يضاف اليها (0.5) مليليتر من المحلول المثبط وتمزج جيدا ويضاف بعدها (0.5) مليليتر من المحلول الملون .

4. محلول الكفء Blank Solution

يوضع (2) ملليتر من المادة الاساس في انبوبة اختبار ثم توضع في حمام مائي بدرجة (37 °C) لمدة (5) دقائق ، بعدها يضاف (0.5) مليليتر من المحلول المثبط وترج جيدا ثم يضاف (0.5) مليليتر من المحلول الملون وبعد مزجها جيدا يضاف (50)
مايكروليتر من الماء المقطر .

ثم توضع جميع الانابيب في مكان مظلم ولمدة (10) دقائق بعدها تقرا الامتصاصية عند طول موجي قدره (510) نانوميتر مقابل محلول الكفء .

(4) الحسابات Calculation

تم حساب فعالية انزيم الفوسفاتيز القاعدي في العينة وفق القانون الاتي :