عزل السلالات الفيروسية

قد توجد سلالات فيروس ما في الطبيعة على أصناف أو انواع عائل معين أو في مناطق معينة، كما قد تنشأ السلالات أيضا على نفس النبات المصاب جهازيا بالسلالة العادية إذ تظهر أعراض غير عادية. هذه الأعراض قد تكون على هيئة بقع صفراء صغيرة أو نيكروزيه، على جزء من أجزاء الورقة المصابة بالموزايك وتحوى سلالات مختلفة عن السلالة الأصلية.

من أكثر الطرق استخداما لعزل السلالات الجديدة هي عزل الفيروس من البقع الموضعية التي تتكون عند عدوى بعض أنواع النباتات وتتلخص الطريقة في أن يخفف مستخلص النسيج المصاب بالماء ثم يعدى به أوراق نباتات تعطي بقعا موضعية عند اصابتها بالفيروس. نتيجة للتخفيف الشديد لمستخلص الجزء النباتي المصاب فانه عند إجراء عملية العدوى يدخل في خلايا أنسجة النبات المعدي عدد قليل من الجزيئات الفيروسية أو جزيء فيروسي واحد يتكاثر وينتقل خلال البلازمودزماتا إلى الخلايا المجاورة حيث يتكاثر أيضا، وينشأ عن ذلك بعض البقع الموضعية على النبات كمناطق تكاثر للفيروس. بعد 3 - 5 أيام من العدوى يقف انتشار الفيروس إلى الخلايا المجاورة عند هذا الحد نتيجة لفعل الحواجز الدفاعية النباتية. كل بقعة هي في الواقع منطقة تكاثر جزيء فيروسي واحد أو بعض الجزيئات الفيروسية وبالتالي إذا ما قطعت بقعه موضعية واحدة وأخذ مستخلصها فان هذا المستخلص غالبا ما يحتوي على سلاله فيروسية متماثلة.

في بعض الحالات قد تحتوى تلك البقع الموضعية على خليط من السلالات وبالتالي لضمان الحصول على سلالة فيروسية عالية النقاوة لا بد من تكرار عملية العدوى والعزل عدة مرات من خلال البقع الموضعية التي يكونها الفيروس. تقطع البقع الموضعية الناتجة من العدوى الأخيرة ثم يعمل مستخلص من كل بقعه ويعدى به نباتات تعطي أعراضا جهازية. وهذه النباتات تستخدم كمصدر الدراسة الدلالة أو السلالات الجديدة.

تستخدم هذه الطريقة مع الفيروسات التي تعطي على بعض أنواع النباتات بقعا موضعية مثل فيروس موزايك الدخان على Nicotiana glutinosa ، Datura stramonium، وفيروس x البطاطس على Gomphrena globosa

بالنسبة لتلك الفيروسات التي لا يعرف لها نباتات تعطى بقعا موضعية فيتم عزل سلالاتها النقية عن طريق تلقيح النباتات التي تعطي أعراضا جهازية، ويجب أن يتم التلقيح تحت ظروف تضمن أن عدوى كثيرا من النباتات يتم عن طريق جزيء فيروسي واحد. ويمكن إجراء ذلك عن طريق التلقيح بالتحضير الفيروسي المخفف بالدرجة التي تسمح بعدوى أقل من نصف النباتات الملقحة.