طريقة (Goodng & Hebert (1967 لتنقية الفيروس من النبات المصاب

هي طريقة مبسطة لتنقية الفيروس, وتتم الخطوات كالتالي:

1- ضع على اوراق النباتات المصابة والذي سبق تجميدها بالفريزر محلول فوسفات الصوديوم احادي الايدروجين بتركيز 0,5 جزيئي, او محلول فوسفات بوتاسيوم ثنائي الايدروجين 0,5 جزيئي, على ان يكون رقم الحموضة الـ(PH) 7,2 وان يكون المحلول محتويا على 1% من: 2- مركابتوايثانول, واترك الجميع لمدة 5 دقائق.

2- رشح خلال قطعة من قماش الموسيلين او الشاش, ثم اضف 8مل من كحول البيوتان لكل 100مل من المستخلص مع التحريك لمدة تزيد عن دقيقة.

3- عامل المستخلص بالقوة الطاردة المركزية بسرعة 10,000دورة في الدقيقة لمدة 30 دقيقة.

4- اضف 4 غرام من الـ(MW 6000)Polyethylene glycol لكل 1000مل من المحلول مع التحريك المستمر ثم يعامل بالقوة الطاردة المركزية بنفس السرعة السابقة ولمدة 15دقيقة.

5- اضف الى الكرة المتكونة بعد الترسيب 20مل من محلول منظم MPO4 buffer 0.01وذلك عند رقم حموضة 7,2 وذلك بالنسبة لكل 1000 مل من المستخلص الاصلي.

6- عامل المعلق بالقوة المركزية بنفس السرعة السابقة ولمدة 15دقيقة, وبهذا نحصل على الفيروس في حالة نقية تقريبا.

ـــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ

امراض النبات (نظري – عملي), المؤسسة العامة للتعليم الفني والتدريب المهني, المملكة العربية السعودية.