التطفير الموجه Site – directed mutagenesis

الفوائد من الخطوات المستعملة في الهندسة الوراثية مكنت من اجراء عمليات تطفير في مواقع محددة من الجينات، والتي تستعمل مفضلة على عمليات التطفير العشوائي، فالتخليق الكيماوي للنيوكليتيدات القليلة مكن العاملين من احلال بعض القواعد او النيوكلوتيدات في توالي محدد من DNA، وهذا الاحلال يستعمل لإظهار طفرات مصممة للتأثير على التعبير الجيني، مثل دراسة تأثير احلال حامض أميني مكان اخر على وظيفة البروتين الناتج لغرض تنشيطه او تثبيطه.

ويتم تحضير النيوكلوتيدات بالتوالي المطلوب الذي يحوي على الطفرة وتهجينها مع عاثيات مفردة الاشرطة من DNA ذات تواليات طبيعية، كما موضح في الشكل (1).

والتركيب الناتج يكون متباين Replicative heteroduplexes ويحول بواسطة الانزيمات الى شكل مزدوج الاشرطة الذي يستطيع التضاعف معطيا جزيئات او اشرطة، واحد طبيعي واخر يحمل الطفرة يستعمل لإصابة البكتريا المضيفة بطريقة التحول ويتضاعف الجين في داخلها ويؤدي الى انعزال النوع الطبيعي والنوع المطفر، والاخير يمكن ان يعزل ويكلون.

وقطع النيوكلوتيدات المخلقة كيماويا يمكن ان تحضر لتحوي على مواقع عديدة من مواقع الفلق بأنزيمات القطع تسمح بإدخال DNA محور وتشفر لبروتينات مطفرة او حاوية على طفرات متعددة وبذلك يمكن انتاج بروتينات معينة مثل ذات المستضدية المتغيرة وبروتينات فاقدة للسمية وغيرها.

شكل 1: التطفير الموجه

المصادر

الخفاجي , زهرة محمود (2008) . التقنية الحيوية الميكروبية (توجهات جزيئية ) . معهد الهندسة الوراثية والتقنية الحيوية . جامعة بغداد .