الغرض من الاختبار Purpose

يستعمل هذا الاختبار للتمييز بين البكتيريا على اساس قدرتها على التأكسد او التخمر لكربوهيدرات معينة .

مبدأ الاختبار Principle

يستعمل هذا الاختبار لتحديد فيما أذا كانت البكتيريا تستعمل الكربوهيدرات لإنتاج الحامض كناتج عرضي . تختبر قدرة البكتيريا غير المخمرة على انتاج الحامض من 6 انواع كربوهيدرات ( كلوكوز glucose ، زايلوز xylose، مانتول mannitol، لاكتوز lactose ، سكروز sucrose ، ومالتوز maltose ). تلقح انابيب تحتوي كربوهيدرات فضلا عن انبوب سيطرة يحتوي وسط اساس (OF) بدون كربوهيدرات. كذلك يستعمل وسط الحديد الثلاثي السكر (TSI) Triple sugar iron agar طريقة (TSI) لتحديد البكتيريا التي تخمير الكلوكوز. يستعمل وسط الاكسدة / التخمر لتحديد قدرة البكتيريا على تخمر الكلوكوز الشكل (A) او اكسدة الكلوكوز الشكل (B). عدم حدوث تفاعل في (TSI) او OF ، فأن البكتيريا تعد غير مستهلكة للكلوكوز الشكل (C) وصفة هيو Hugh و ليفسون Leifson تستعمل نسبة واطئة من الببتون الى كمية محدودة من الكربوهيدرات ، اختزال هذه النسبة المحددة من الببتون يكون الامينات القلوية التي تحجب انتاج الحامض الناتج من الاكسدة الايضية.

لتفسير اختبار (OF) يتطلب انبوبتين ملقحتين , احدهما يغطى سطحه بالزيت المعدني، منتجة بيئة لاهوائية وحدوث تغير في اللون دليل على التخمر. اما انتاج الحامض في الانبوب غير المغطى وتغير اللون دليل على الاكسدة.

الوسط Media

اذابة )  2 غم) من الكازائين المهضوم Pancreatic digest of casein و (10.0 مل ) من الكليسرول glycerol ، و ( 0.03 غم )  احمر الفينول (طريقة King) , و ( 3 غم )  من الاكار ، في كمية من الماء المقطر ويعدل الاس الهيدروجيني الى  7,3ثم يكمل الحجم الي 1000مل ، ويعقم بجهاز المؤصدة بدرجة 121م وبضغط 15 باوند/ انج² لمدة 15 دقيقة . ثم يوزع في انابيب. (ملاحظة يفضل توزيع الوسط في انابيب ثم تعقم )

طريقة العمل Method

1- لتحديد انتاج الحامض من الكربوهيدرات ، يلقح وسط الاكار (اذ يحتوي كل وسط نوعا واحدا من الكاربوهيدرات )ببكتيريا بعمر (18 - 24 ) ساعة وذلك بالطعن (4 - 5 ) مرات بعمق (1 سم ) بوساطة ناقل معدني مستقيم ..(ابرة). ملاحظة / انبوبتان من وسط الكلوكوز OF الملقحة، يضاف الى سطح احداها فازاین ذائب او البارافين المعقم للكشف عن التخمر.

2- تحضن الانابيب بدرجة حرارة (35 - 37 ) م بظروف هوائية لمدة (7) ايام .

النتائج المتوقعة Expected Results

النتيجة الموجبة انتاج الحامض (A) يتحول اللون في عمق الانبوبة الحاوية الكاربوهيدرات الى الاصفر .

* نتيجة موجبة ضعيفة AW) Weak-positive) : تكون الحامض ضعيف يستدل عنه عن طريق مقارنة الانابيب الحاوية على الكاربوهيدرات مع الانابيب غير الحاوية الكاربوهيدرات. اغلب البكتيريا التي تنمو في وسط الأساس (OF-base) تنتج تفاعل قاعدي اذا يكون لون الوسط في الانبوب الحاوي على الكربوهيدرات مماثل للون الوسط في الانبوبة غير الملقحة، واذا كان لون الوسط في انبوبة السيطرة الملقحة يصبح احمر غامقا (قاعديا) فان النمو يعد

موجبا ضعيفا ، على افتراض مقدار النمو هو نفسه في كلا الأنبوبين

 النتيجة السالبة : لون احمر او قاعدي ) alkaline K) في عمق الانبوبة الحاوية للكاربوهيدرات مماثل الى لون أنبوب السيطرة الملقحة.

* عدم تغيير اللون (No change (NC او متعادل (Neutral (N : يوجد نمو في الوسط ، والوسط الحاوي للكربوهيدرات ووسط السيطرة يتحول قاعديا (احمر).

* البكتريا التي لا تنمو نهائيا على وسط ( OF ) ، توضع علامة. No growth (NG)

الملاحظات :

* نمو البكتيريا البطيء قد لا يعطي نتائج لعدة ايام .

* اذا كانت الانابيب ذات غطاء محكم فيجب ترك الغطاء مفتوحا قليلا اثناء مدة الحضن للسماح بتبادل الهواء، اذ ان انبوب السيطرة والانابيب الحاوية للكربوهيدرات التي لا تتأكسد ربما لا تصبح قاعدية. alkaline