الغرض من الاختبار Purpose

يستعمل هذا الاختبار للتمييز بين المكورات العنقودية الذهبية S.aureus (الموجبة) وبقية المكورات العنقودية الاخرى (السالبة).

مبدأ الاختبار Principle

تنتج بكتيريا aureus.S الشكلين من انزيم التجلط Coagulase وهو المرتبط والحر. المرتبط او يسمى عامل التكتل Clumping factor الذي يرتبط بالجدار الخلوي للبكتيريا ويتفاعل مباشرة مع الفايبرينوجين Fibrinogen وينتج عنه ترسيب الفايبرينوجين على بكتيريا المكورات العنقودية، مما يتسبب في تكتل الخلايا على البكتريا عندما يخلط المعلق البكتيري بالبلازما. ان وجود انزيم Coagulase المرتبط يرتبط مع وجود انزيم التجلط الحر، وهو انزيم الخارج الخلوي الذي يسبب بتكوين الخثرة عندما تحضن مستعمرات aureus .S مع البلازما وان آلية التخثر تتضمن تنشيط عامل تخثر البلازماplasma Coagulase reacting factor (CRF) ، الذي يحور أو يشق جزيئة الثرومبين لتكوين معقد انزيم التخثر وعامل تخثر البلازما و هذا المعقد بدوره يتفاعل مع الفايبرينوجين Fibrinogen لإنتاج خثرة الفايبرين Fibrin clot .

طريقة العمل Method

A - طريقة الشريحة الزجاجية

1- وضع قطرة من بلازما التخثر (يفضل استعمال بلازما الارانب في مادة Ethylene diamine tetra acetic acid [EDTA] على شريحة زجاجية نظيفة وجافة.

2- وضع قطرة من ماء المقطر او محلول الملحي على بعد مسافة معينة من قطرة البلازما واعتبارها كسيطرة

3- تلقح كل قطرة بالبكتريا المعزولة باستعمال ناقل معدني Loop .

4-  تمزج جيدا بقضبان الخشب او البلاستك المجهزة من قبل الشركة.

5-  تحرك (تهز) الشريحة الزجاجية برفق لمدة (5-10) ثواني.

النتائج المتوقعة Expected Results

النتيجة الموجبة : تكتل واضح في قطرة البلازما خلال (10) ثواني او اقل ، وعدم تكتل قطرة الماء او المحلول الملحي في الجانب الايسر .

 النتيجة سالبة : عدم تكتل أي من القطرات البلازما والماء المقطر او المحلول الملحي في الجانب الايمن .

B - طريقة الانابيب Tube Test

1- وضع (0,5) مل من البلازما (مع EDTA ) في انابيب اختبار ثم تلقح بعدد من المستعمرات لتعطي معلق حليبي اللون.

2- تحضن الانابيب في ظروف هوائية بدرجة حرارة (35 - 37 ) م لمدة (4 ساعات). يلاحظ تكوين خثرة .

النتائج المتوقعة Expected Results

النتيجة الموجبة: وجود تخثر بأي حجم . في الجانب الايسر .

النتيجة السالبة: لا يوجد تخثر . الشكل في الجانب الايمن

الملاحظات

1 - (طريقة الشريحة الزجاجية)

التكتل في كلتا القطرتين يؤشر الى ان الكائن البكتيري لديه تلازن ذاتي Autoagglutinates، وهذا غير مناسب للاختبار بطريق الشرائح لتلك الكائنات .

2- طريقة الانابيب

تكون نتائج الاختبار موجبة خلال 4 ساعات وتعد النتيجة سالبة بعد (24 ساعة).

* اذا كانت النتيجة سالبة خلال الاربع ساعات، فيجب حضن الانابيب بدرجة حرارة الغرفة لمدة 24 ساعة ومن ثم ملاحظة وجود التخثر مرة أخرى .