التجربة: فصل الأحماض الامينية باستخدام كروماتوجرافيا الورق

• مقدمة

يختلف الأساس النظري لكروماتوجرافيا الورق عن الأساس النظري لكروماتوجرافيا الطبقة الرقيقة و الأساس النظري لكرومتوجرافيا العمود, في اعتماد لكروماتوجرافيا الورق على اختلاف معامل التوزيع للمواد الكيميائية في خليط المذيبات المختلفة المستخدمة كطور متحرك؛ كذلك الفرق بينهما هو سهولة وسرعة الفصل,  وكمية الخليط المراد فصله في كروماتوجرافيا العمود والطبقة الرقيقة. ففي كروموتوجرافيا الورق يمر مخلوط من المواد مذابا على ماز ثابت (الورق والماء الممتز عليها) مدفوعا بسائل يرتفع خلال مسامات الورق على أساس الخاصية الشعرية, تختلف المسافات التي تصلها المواد إلى أعلي باختلاف البناء الجزئي للمواد ,لذلك تستخدم تقنية الكروماتوجرافيا للتعرف على المواد بدلالة كمية بعبر عنها بالرمزR_f

 =  المسافة التي تقطعها المادة/المسافة التي تقطعها مقدم المذيب.R_f

 وهذه الطريقة تعتبر تحليلية بالدرجة الأولى لأن العينة المستخدمة يجب أن تكون قليلة.

• الأهداف:

1-أن يفصل الطالب خليط من الأحماض الأمينية باستخدام كروموتجرافيا الورق.

2-أن يشرح الطالب أسس الفصل باستخدام كروموتجرافيا الورق.

• الأجهزة والأدوات المطلوبة:

 ورق ترشيح– المذيب (19مل ماء مقطر, 40  مل بيوتانول عادي,11 مل إيثانول مطلق) –محاليل أحماض أمينية -(جليسين- البرولين- الفينيل الانين)- محلول الضبط (0.5 جم من الجليسين في 100ملي حامض الهيدروكلوريك  0.1 مولار)- محلول الصبغة (0.2 جم من الننهيدرين, 99 مل بيوتانول عادي,1 مل حامض الأسيتيك).

وضع الورق في الكأس المشبع ببخار الطور المتحرك            شكل توضيحي لقياس Rf      

• المخاطر:

• البيوتانول والإيثانول مواد قابلة للاشتعال وينبغي استخدامه بعيدا عن اللهب المباشر, ويغلقا بإحكام  بعد الاستخدام.
• حامض الخليك مهيج للأنف ويسبب التهاب الجلد وقابل للاشتعال تحتاج إلى لبس القفازات  والكمامات.
• حامض الهيدروكلوريك  لاذع وضار للعين والرئة والجلد.

• التخلص من البقايا:

 يتم التخلص من البقايا بغسلها بالماء والأسيتون.

• خطوات العمل:

1-ارسم بقلم رصاص خط عبر الورقة يبعد 3 سم من أسفلها, ضع نقطتين عليه ا, ب تبعدان 2 سم من بعضها.

2-باستخدام قطارة نظيفة ضع على النقطة (ا) قطرة من محلول الأحماض الأمينية كافية لتكوين حلقة قطرها 0.5 سم , ضع على النقطة ب قطرة من محلول الجليسين كافية لتكوين حلقة قطرها 0.5 سم اترك الورقة لتجف في الهواء.

3-ضع 35 مل من المذيب في المخبار المدرج وعلق شريحة ورق الترشيح إلى الذراع الأفقي للساق الزجاجية (ج), عدل وضع الورقة بحيث يكون أسفلها بعيدا عن سطح المذيب بمقدار   1سم غطي المخبار بسدادة وضعه في مكان بعيد عن التيارات الهوائية لمدة 5-8 ساعات.

4- انزل شريحة الورقة التي أصبحت مشبعة ببخار جزئيات المذيب بحيث ينغمر طرفها السفلي بحوالي 1سم في المذيب, ثم أعد سد المخبار بسدادة ثم اتركها لمدة  8-12ساعات ,هذه الفترة الزمنية كافية لأن يرتفع المذيب إلى حوالي 10سم.

5- خذ شريحة ورقة الترشيح وعلم ارتفاع  جهة المذيب على الورقة باستخدام قلم الرصاص. جفف الورقة بتيار من الهواء البارد ثم رذ ذ الورقة بمحلول الننهدرين وذلك داخل غرفة الغازات  اترك الشريحة الورقية تجف.

6-ترى بوضوح مواقع الأحماض الامينية الثلاثة على هئية بقع ملونة  حيث يدل اللون الأصفر على البرولين أما بقع الجليسن والفينيل اللانين فهي زرقاء, قس ارتفاع كل بقعة  اعتباراً من الخط المرسوم أسفل الورقة إلى منتصف الدائرة للبقعة لكل حمض.

7- استخدم محلول الضبط من الجليسين في هذه التجربة للتفريق بين البقعة الزرقاء الخاصة بالجليسين والفينيل الانين . وسوف ترى أن معامل توزيع للفينيل الانين أكبر من معامل توزيع الجليسين.

• الإضافات :

حدد المسافة لارتفاع الأحماض الأمينية ومسافة ارتفاع المذيب.

 احسب معامل التوزيع.

• الأسئلة:

- وضح أسس الفصل باستخدام كروماتوجرافيا الورق؟

-اشرح تجربة عملية لفصل خليط من الأحماض الامينية باستخدام كروماتوجرافيا الورق؟

• المراجع:

• Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry (5th Edition) by A.I. Vogel, A.R. Tatchell, B.S. Furnis, and A.J. Hannaford (Hardcover - Feb 9, 1996)
• Practical Organic Chemistry  by Frederick G. M. and Bernard C. S. Forth Edition (1960)