التجربة: إعداد شرائح وفصل الإصباغ من أوراق السبانخ باستخدام كروماتوجرافيا الطبقة الرقيقة.

• مقدمة

الأساس النظري لكروماتوجرافيا الطبقة الرقيقة هو نفس الأساس لكروماتوجرافيا العمود, والفرق إن الماز في هذه الحالة يكون على شريحة من الزجاج أو البلاستيك, وتوضع العينة على شكل بقعة صغيرة من المحلول قرب الطرف الأسفل, وبعد تبخر المذيب توضع الشريحة في وضع شبه رأسي في مذيب مناسب شريطة أن لا يصل المذيب إلى بقعة العينة, ثم يصعد المذيب بالخاصية الشعرية مار ببقعة العينة, ترفع الشريحة ويجري فحصها بطريقة مناسبة.

للتعرف على المواد بدلالة كمية يعبر عنها بالرمز R_f.

 =  المسافة التي تقطعها المادة/المسافة التي تقطعها مقدم المذيب.R_f

 وهذه الطريقة تعتبر تحليلية بالدرجة الأولى لأنه يصعب الحصول على المواد المفصولة نظراً لأن كمية العينة المستخدمة يجب أن تكون قليلة.

• الأهداف:

- أن يستوعب الطالب فكرة و أسس الفصل بواسطة كروماتوجرافيا الطبقة الرقيقة.

- أن يقوم الطالب بإجراء فصل الإصباغ من أوراق السبانخ باستخدام هذه التقنية.

• الأجهزة والأدوات المطلوبة:

هلام  السليكا – مخلوط ميثانول وكلوروفورم بنسبة (2:1)- إيثانول - أسيتون - إيثر- كبريتات الصوديوم – أوراق السبانخ).                                                    

• المخاطر:

- الميثانول والكلورفورم من المواد السامة التي ينبغي على الطالب الحرص أثناء التعامل معها

- الإيثانول والأسيتون والإيثرات مواد قابلة  للاشتعال ينبغي سدها بإحكام وعدم تقريبها للهب المباشر.

• التخلص من البقايا:

المواد المتبقية السائلة (مذيبات أو مملصات)  إذا كانت كمياتها كبيرة يمكن الحصول عليها نقية وذلك بالتقطير واستعمالها مرةً أخرى,  أما الشرائح فيتم التخلص منها بوضعها في أكياس النفايات.

• خطوات العمل:

1. ضع 35 جم من هلام السليكا - النوع –G   في 100مل من مخلوط كلوروفورم  وميثانول بنسبة 1:2 حجما يحرك الخليط جيداً لتحضير معلق متجانس.
2. أغمس شريحتين ملتصقتين معاً؛ ثم يسحبا معاً وهما ملتصقتين ويتركا حتى يجفا.
3. ينشط الطور أو الصنف الثابت بتجفيف الشرائح في فرن درجة حرارته 110 د.م.؛ أو على اللهب المباشر وذلك بوضعها في كأس في وضع مائل وتعريض الكأس للهب.
4. خذ عدد من أوراق السبانخ الأخضر واسحقها في هاون في وجود قليل من الإيثانول أو الأسيتون مع إيثر بترولي أو هكسان بنسبة (2:1).
5. انقل السائل إلى وعاء أخر وأعد استخلاص مسحوق الأوراق مرة أخرى ثم رشحه, واغسله ثلاث مرات.
6. باستخدام ماصة صغيرة الحجم انقل قطرة من المحلول المستخلص من السبانخ ضعها على الشريحة التي تم إعدادها سابقاً مع مراعاة تحديد نقطة البداية (بقلم رصاص) والتي لابد أن تكون على بعد اسم من حافة الشريحة - ممكن تحضير ماصة يدوياً وذلك بتسخين أنبوبة قياس درجة الإنصهار مع الشد الهاديء لتحصل على ماصة مناسبة الحجم تستخم مرة واحدة فقط – اترك الشريحة تجف .

 فصل مخلوط مكون من خمس مواد          فصل مخلوط مكون من مادتين         فصل مخلوط مكون من ثلاث مواد 

طريقة تحضير ماصة صغيرة

1. جهز كأس به الطور أو الصنف المتحرك المكون من البنزين والأسيتون بنسبة 1:7حجما وأحكم غطاء الكأس لمدة خمس دقائق حتى يتشبع الكأس ببخار الخليط.                                      
2. أغمس طرف الشريحة القريب للبقعة في خليط (البنزين والأسيتون) احرص أن لا يصل المذيب إلى البقعة  وفي وضع مائل قليل ثم انتظر قليلا قبل أن يصل إرتفاع الطور المتحرك أو المملص إلى إلى حافة الشريحة ب1سم أخرج الشريحة واتركها تجف.
3. لاحظ المسافة التي قطعتها المادة من نقطة البداية؛ عين Rf

- دون ملاحظتك واستنتاجاتك

• الإضافات الأخرى:

يلاحظ تكون بقع مختلفة لماذا؟ -

• الأسئلة:

- وضح فكرة وأسس الفصل باستخدام كروماتوجرافيا الطبقة الرقيقة ؟

- اشرح الخطوات العملية المتبعة لفصل الإصباغ من أوراق السبانخ باستخدام كروماتوجرافيا الطبقة الرقيقة ؟ 

• المراجع:

• Practical Organic Chemistry  by Frederick G. M. and Bernard C. S. Forth Edition (1960)
• Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry (5th Edition) by A.I. Vogel, A.R. Tatchell, B.S. Furnis, and A.J. Hannaford (Hardcover - Feb 9, 1996)
• Chemical Analysis Modern Instrumentation Methods and Techniques. by Francis R. and Annick R. Second Edition, )2007( by John Wiley.