الغرض من الاختبار Purpose

يستعمل هذا الاختبار لتحديد قدرة البكتيريا لانتزاع الامين تأكسديا من الفنيل الانين phenylalanine وتحويله الى حامض فنيل بايروفك phenyl pyruvic acid ، وبوساطة هذا الاختبار يمكن تمييز جنس Providencia و Proteus, Morganella من العائلة المعوية .Enterobacteriaceae

مبدأ الاختبار Principle

تقوم البكتيريا التي تنتج انزيم phenylalanine deaminase بإزالة الامين (NH₂) من phenylalanine ، ويكون ناتج التفاعل الامونيا ( NH₃) و phenyl pyruvic acid . ويكشف عن الاخير بإضافة بضع قطرات من كلوريد الحديديك ferric chloride بتركيز ( %10 )، يتكون لون اخضر معقد بين المركبين.

الوسط Media

اذابة ( 2غم ) من فنيل ألانين Phenylalanine ،( 3 غم )  خلاصة الخميرة، (5 غم ) كلوريد الصوديوم NaCl  ,(1غم ) فوسفات ثلاثي الصوديوم Na3PO4 ، و( 12غم ) اکار agar ، في كمية من الماء المقطر ويعدل الاس الهيدروجيني الى 7,3ثم يكمل الحجم إلى 1000 مل ، ويعقم بجهاز المؤصدة بدرجة 121م وبضغط 15 باوند / انج² لمدة 15 دقيقة . ثم وزع في انابيب وتترك بالشكل مائل لحين تصلبها . ملاحظة (يفضل توزيع الوسط في انابيب ثم تعقم )

طريقة العمل Method

1- يلقح سطح الوسط الفنيل ألانين phenylalanine المائل بقطرة واحدة من مزرعة بكتيرية على وسط نقيع القلب والدماغ السائل ( brain-heart infusion broth) بعمر( 24 ساعة )

 2- يحضن من (18 - 24 ) ساعة ( او لحين ظهور نمو واضح ) بدرجة (35 - 37) م في ظروف هوائية مع بقاء غطاء الانبوب مفتوحا قليلا.

3 - يضاف (4 - 5 ) قطرات من كلوريد الحديديك ferric chloride السائل على السطح المائل للوسط بعد انتهاء الحضن.

النتائج المتوقعة Expected Results

*النتيجة الموجبة : ظهور اللون الاخضر على السطح المائل بعد اضافة كلوريد الحديديك ferric chloride الشكل A

* النتيجة السالبة : عدم ظهور لون على سطح الوسط المائل بعد اضافة كلوريد الحديديك ferric chloride الشكل B

ازالة مجموعة الامين من الحامض الاميني Phenylalanine يؤدي الى تكوين حامض phenyl pyruvic الذي يتفاعل مع كلوريد الحديد FeCl3 مما يؤدي الى تكون لون اخضر يدل على ايجابية الاختبار