تعبر درجة الفصل عن كيفية سير الطبقات داخل عمود الفصل، وهل كان هناك تداخل بين هذه الطبقات أم لا. ويمكن معرفة ذلك من شكل منحنى الكروماتوغرام لمادتين يكون منحنى الفصل لكل منهما في الكروماتوغرام متجاورين. فإذا كانت عملية الفصل ناجحة وكفاءة العمود عالية فإن منحنى كل مادة من هاتين المادتين يكون منفصلاً عن الآخر بشكل تام. ويعبر عن درجة الفصل بالعلاقة التالية: حيث t_R تعني زمن الاستبقاء و W تعني عرض المنحنى لكل مادة.

تتم الحسابات بحيث تكون قيمة R بالموجب

يجب معرفة أن هذه العوامل قد تتغير لكل من الطبقتين المتجاورتين، حيث إنها جميعاً تعتمد على طبيعة كل من الوسط الساكن والوسط المتحرك.

من المفيد توضيح أن الفصل R_S يختلف عن الكفاءة ،N ، إذ إن الفصل يعتمد على طبيعة الوسط الساكن والوسط المتحرك، ودرجة الحرارة، وطول الوسط الساكن (العمود) في حين الكفاءة N تعطي تصوراً عن مدى انتشار الطبقة، وتعتمد على طريقة إنشاء العمود وطريقة تعبئته بالوسط الساكن وعلى سرعة الوسط المتحرك.