الغرض من الاختبار Purpose

يستعمل هذا الاختبار للتمييز بين البكتيريا التي لها القدرة على انتاج انزيم casease والبكتيريا غير المنتجة للانزيم

مبدأ الاختبار Principle

تتطلب العديد من البكتيريا البروتينات كمصدر للأحماض الأمينية والمكونات الأخرى للعمليات البنائية, بعض البكتيريا لديها القدرة على إنتاج وافراز الإنزيمات في البيئة التي تحفز هدم البروتينات الكبيرة إلى ببتيدات اصغر أو الى احماض امينية مفردة والتي يمكن امتصاصها عبر الغشاء البلازمي. تنتج بعض البكتريا انزيم Casease الذي يحلل بروتين الحليب (الكازئين الذي يكسب الحليب اللون الأبيض)، إلى اجزاء أصغر، وبذلك يفقد الكازين عادة قوامه غير الشفاف ويصبح شفافا. يكشف عن وجود انزيم casease بوساطة اختبار اكار الحليب Milk agar، ، هو وسط يحتوي على كازائين مهضوم انزيميا pancreatic digest of casein , خلاصة الخميرة Yeast extract ,دكستروز dextrose ، مسحوق الحليب powdered milk . عند تلقيح اطباق اكار الحليب بالبكتيريا الموجبة لهذا الاختبار تقوم بأفراز انزيم casease الذي ينتشر في الوسط الزرعي حول المستعمرة البكتيرية وتكون منطقة شفافة نتيجة تحلل الكازائين. اما البكتيريا السالبة للاختبار فلا تنتج انزيم casease ولا تكون منطقة شفافة حول النمو البكتيري.

شكل (1) تحلل الكازين : تحلل البروتين يحصل من كسر الاواصر الببتيدية بين الاحماض الامينية ويؤدي الى انتاج ببتيدات او احماض امينية

الوسط Media

اذابة ( 5 غم ) كازائين مهضوم انزیمیا pancreatic digest of casein، (2,5 غم ) خلاصة الخميرة Yeast extract ,(100 غم ) مسحوق حليب غیر دسم Powdered nonfat milk ، (1 غم ) كلوكوز Glucose ،( 15 غم) اکار Agar ، في كمية من الماء المقطر ويعدل الأس الهيدروجيني الى 6,9 – 7,1 ثم يكمل الحجم الي 1000 ملليتر ، ويعقم بجهاز المؤصدة بدرجة 121 وبضغط 15 باوند / انج² لمدة 15 دقيقة ويصب في اطباق وتترك لحين تصلبها

طريقة العمل Method

1- يقسم طبق الوسط الزرعي على اجزاء متساوية ويعلم بأسماء البكتيريا المراد اختبارها ومنطقة السيطرة.

2- يلقح كل جزء بالبكتيريا المراد اختبارها Bacillus cereus و Escherichia coli مع ترك منطقة السيطرة بدون تلقيح .

3- يحضن الطبق بظروف هوائيا بدرجة حرارة ( 35 ) م لمدة (24 ) ساعة. وبالشكل مقلوب

4- اختبار الطبق بملاحظة المنطقة الشفافة حول المستعمرة البكتيرية .

النتائج المتوقعة Expected Results

* النتيجة الموجبة : وجود منطقة شفافة حول المستعمرة على الاكار يدل على وجود الانزيم.

* النتيجة السالبة : عدم وجود منطقة شفافة حول المستعمرة على الاكار يدل على عدم وجود الانزيم.

شكل (2) اختبار Milk Agar المستعمرة الأعلى موجبة الاختبار , المستعمرة السفلى سالبة الاختبار