المبدأ الأساسي  Basic Princip

تم تقدير السكريات السداسية المرتبطة بالبروتين عن طريق الترسيب بواسطة الايثانول 95% بدرجة حرارة الغرفة , حيث ان الناتج اللوني يتكون بوجود الاورسينول  Orcinol. وتم قياس التركيز عن طول موجي    (520)nm.⁽¹⁾

الكواشف Reagents 

-1ايثانول بتركيز 95%

-2 محلول هيدروكسيد الصوديوم NaOH  بتركيز (0.1 N) .

 -3محلول حامض الكبريتيك 60%  H₂SO₄ .

 -4محلول الاورسينول :- يذاب (2)gm  من بلورات الاورسينول في (100) ml H₂SO₄ 30%

-5 محلول السكر:- يحضر باذابة (100) mg من الكلاكتوز و(100)mg المانوز في (100)ml ماء مقطرويشبع بحامض البنزويك, ويخزن في مكان بارد .

-6 محلول العمل :- يمزج  (1)ml من محلول السكر مع (4)ml ماء مقطر , هذا المحلول يحضر يوميا .( يعتبرمحلول العمل المحلول القياسي الذي تركيزه هو

طريقة العمل   Procedure

اضيف (5) ml  من الايثانول الى  ml (0.1) من مصل الدم لترسيب البروتين . يوضع في جهاز الطرد المركزي لمدة (20) دقيقة وبسرعة (3000) r.p.m  لاعطاء محلول نقي . ويؤخذ الراسب ويغسل مع (5) ml من الايثانول ويوضع مرة اخرى بجهاز الطرد المركزي  ومن ثم  اضيف(0.5) ml  من محلول (0.1) N هيدروكسيد الصوديوم NaOH لاذابة الراسب , ويتم اضافة (1.25)ml  من الاورسينول  الى كل من انبوبة الاختبار وانبوبة المحلول القياسي (0.5ml محلول العمل) والبلانك( 0.5ml الماء المقطر) وبعدها يضاف الى الانابيب(7.5) ml  من محلول حامض الكبريتيك 60%  وتوضع الانابيب في حمام مائي بدرجة  (80 ± 0.5)^ocلمدة دقيقتين , تبرد الانابيب وتقاس الامتصاصية عند طول موجي (520) nm خلال 15 دقيقة .

الحسابات   Calculation 

حسب تركيز السكريات السداسية المرتبطة بالبروتين PBH في العينة بوحدة (mg / dl) وفق القانون الآتي :

A_x = امتصاصية النموذج

A_b = الامتصاصية البلانك

A_st =الامتصاصية للمحلول القياسي

=  100معامل التخفيف

-----------------------------------------------

1.Weimer, H.E. and Moshin, J.R. (1953). "Comparative effects of intramuscular injections of ACTH, cortisone, and saline on serum glycoprotein levels ". Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 84: 34-37.