تنقية الفايبرينوجين : Fibrinogen purification

اتبعت تقنيات مختلفة لفصل وتنقية الفايبرينوجين منها ما لاحظه " دنس"  من ظهور راسب جيلاتيني سماه بلازمين Plasmin في الدم عند تشبعه بمحلول ملح الطعام كما لاحظ " فردريك " حصول خثرة بالحرارة تمكن من فصل بروتينات مختلفة بدرجتين حراريتين مختلفتين وأشار إلى أن هذا البلازمين يتكون من نوعين من البروتينات احدهما هو البروتين المسؤول عن عملية تكون الخثرة وسماه بالفاييرينوجين . أما بالنسبة لأول عملية تمليح Salting-out بسيطة لبلازما الدم فقد أجريت باستعمال محلول نصف مشبع من كلوريد الصوديوم لفصل ونتقية الفايبرينوجين أجراها الباحث همرستن " بعدها أصبحت هذه الطريقة النموذج الأمثل في فصل هذا البروتين خلال تلك الفترة. اعتمادا على النتائج الإيجابية لهذه الطريقة قام " فلوركين " بتطويرها وذلك بإدخال متغيرين آخرين هما الأس الهيدروجيني ودرجة الحرارة ، تمكن من خلالها الحصول على كفاءة فصل أعلى من بقية البروتينات وفتوحات التلف ، كما أجريت عدة دراسات حول كفاءة عملية التملح باستعمال أملاح جديد مثل كبريتات الأمونيوم وفوسفات البوتاسيوم ، بينما فضل الباحث " ويد " اعتاد طريقة جديدة أساسها تجميد البلازما ثم تركها تتميع فيعلق الفايبرينوجين نتيجة الفصل بالنبذ ثم تنقيته بغسله بالمحلول الفسلجي البارد ومن خلال هذه الطريقة الجديدة ثم الحصول على نقاوة عالية.

يعتبر "كون" وجماعته من الأوائل الذين وضعوا الأساس لمنظومة فصل و تنقية مكونات الدم باستخدام تقنية التجزئة Fractionation عن طريق السيطرة التوافقية لكل المتغيرات في المنظومة التي تسمح لاخبار انسب الظروف لفصل بروتين معين منها كالتركيز الملحى وتركيز البروتين ومزيج الكحول والماء والأس الهيدروجيني وأخيرا درجة الحرارة حيث تمكن هذا الفريق من الباحثين من فصل مكونات بلازما الدم بعدها بدأت دراسات تعتمد بشكل أو بآخر على الأجزاء الرئيسية التي فصلها " كون " وجماعته. توصل "جون" وجماعته من فصل الراسب الأول Fraction-I بنفس المتغيرات التي استخدمها " كون " وجماعته حيث أن الراسب الأول يحتوي 60 - 65 % من الفايبرينوجين ، أما النسب المتبقية فتمثل الالبومين 7% وكلوبينات الفا ٨% وكلوبيلينات بيتا 15% واخيراً كلوبيلينات كاما ٧% بعدها عمل على تنقيته باستخدام المحلول الدارئ ستيرات الصوديوم 0.05 مولار في أسد هيدروجين 6.3 وتنقيته بشكل أكثر دقة باستخدام مرشحات خاصة وسمى الفايبرينوجين النقى بــ 2-1-Fraction.

عرض الباحث " موريسون " طريقة مفصلة لتنقية الفايبرينوجين اعتمدت بالأساس على فصل الراسب الأول (Fraction -1 (F-I بطريقة  " كون " وجماعته ثم أضاف اليها خطوتين أساسيتين لفصل الفايبرينوجين أولهما ترسيبه في أس هيدروجيني قريب من 5.1 تاركاً أغلب البروتينات الذائبة في المحلول. وثانيهما، ترسيب الكلوبيلينات غير الذائبة التي تبقى مع الفابيرينوجين بعد الترسيب في أس هدروجيني 5.1 ومن ثم تبرد المحلول من 20 ْم إلى الصفر المئوي وفي أس هدروجيني قريب من 6.3 باستخدام سترات الصوديوم مع المحافظة على القوة الأيونية 0.3 وتركيز من الكحول الاثيلى بحدود من 0.5 - 1.5 %.

حصل بعض التطورات على طريقة " كون " وجماعته في فصل بروتينات بلازما الدم البشري. إذ قام فريق من الباحثين بالاعتماد على نفس المتغيرات و استعمال نفس المنظومة ما عدا استخدام الايثر Diethyl ether .