1

المرجع الالكتروني للمعلوماتية

النبات

مواضيع عامة في علم النبات

الجذور - السيقان - الأوراق

النباتات الوعائية واللاوعائية

البذور (مغطاة البذور - عاريات البذور)

الطحالب

النباتات الطبية

الحيوان

مواضيع عامة في علم الحيوان

علم التشريح

التنوع الإحيائي

البايلوجيا الخلوية

الأحياء المجهرية

البكتيريا

الفطريات

الطفيليات

الفايروسات

علم الأمراض

الاورام

الامراض الوراثية

الامراض المناعية

الامراض المدارية

اضطرابات الدورة الدموية

مواضيع عامة في علم الامراض

الحشرات

التقانة الإحيائية

مواضيع عامة في التقانة الإحيائية

التقنية الحيوية المكروبية

التقنية الحيوية والميكروبات

الفعاليات الحيوية

وراثة الاحياء المجهرية

تصنيف الاحياء المجهرية

الاحياء المجهرية في الطبيعة

أيض الاجهاد

التقنية الحيوية والبيئة

التقنية الحيوية والطب

التقنية الحيوية والزراعة

التقنية الحيوية والصناعة

التقنية الحيوية والطاقة

البحار والطحالب الصغيرة

عزل البروتين

هندسة الجينات

التقنية الحياتية النانوية

مفاهيم التقنية الحيوية النانوية

التراكيب النانوية والمجاهر المستخدمة في رؤيتها

تصنيع وتخليق المواد النانوية

تطبيقات التقنية النانوية والحيوية النانوية

الرقائق والمتحسسات الحيوية

المصفوفات المجهرية وحاسوب الدنا

اللقاحات

البيئة والتلوث

علم الأجنة

اعضاء التكاثر وتشكل الاعراس

الاخصاب

التشطر

العصيبة وتشكل الجسيدات

تشكل اللواحق الجنينية

تكون المعيدة وظهور الطبقات الجنينية

مقدمة لعلم الاجنة

الأحياء الجزيئي

مواضيع عامة في الاحياء الجزيئي

علم وظائف الأعضاء

الغدد

مواضيع عامة في الغدد

الغدد الصم و هرموناتها

الجسم تحت السريري

الغدة النخامية

الغدة الكظرية

الغدة التناسلية

الغدة الدرقية والجار الدرقية

الغدة البنكرياسية

الغدة الصنوبرية

مواضيع عامة في علم وظائف الاعضاء

الخلية الحيوانية

الجهاز العصبي

أعضاء الحس

الجهاز العضلي

السوائل الجسمية

الجهاز الدوري والليمف

الجهاز التنفسي

الجهاز الهضمي

الجهاز البولي

المضادات الحيوية

مواضيع عامة في المضادات الحيوية

مضادات البكتيريا

مضادات الفطريات

مضادات الطفيليات

مضادات الفايروسات

علم الخلية

الوراثة

الأحياء العامة

المناعة

التحليلات المرضية

الكيمياء الحيوية

مواضيع متنوعة أخرى

الانزيمات

علم الاحياء : الأحياء الجزيئي : مواضيع عامة في الاحياء الجزيئي :

Gel Electrophoresis Assay of Eukaryotic Replication Origins

المؤلف:  Robert Schleif

المصدر:  Genetics and Molecular Biology

الجزء والصفحة:  2nd Edition , p74-76

2025-03-12

132

It has been possible to construct artificial yeast chromosomes by combining isolated centromeres, telomeres, and autonomously replicating sequences known as ARS sequences. Although ARS sequences function in the artificial chromosomes, it is interesting to know whether they also normally function as origins. A gel electrophoresis technique based on the Southern transfer technology as described in the previous chapter permits examination of this question.

Experiments have shown that ordinarily gel electrophoresis separates DNA according to molecular weight. If, however, the voltage gradient is increased five-fold above normal to about 5 V/cm, and higher than normal concentrations of agarose are used, then the separation becomes largely based on shape of the DNA molecules rather than their total molecular weight. Normal electrophoresis and this shape-sensitive electrophoresis can be combined in a two dimensional electrophoretic separation technique that is particularly useful in the analysis of replication origins. The DNA fragments necessary for the analysis are generated by cleaving DNA extracted from cells with restriction enzymes. These cut at specific sequences, and will be discussed more extensively in a later chapter. A DNA sample obtained by cutting chromosomal DNA with such a restriction enzyme is first separated according to size by electrophoresis in one direction. Then it is separated according to shape by electrophoresis in a direction perpendicular to the first. After the electrophoresis, the locations of the fragments containing the sequence in question are determined by Southern transfer.

Let us first consider the two-dimensional electrophoretic pattern of DNA fragments that would be generated from DNA extracted from a large number of growing cells if replication origins were to enter a 1000 base pair region from the left (Fig. 1). In the majority of the cells no replication origin will be on the 1000 base pair stretch of DNA. Therefore, after cutting with the restriction enzyme these stretches will be simple 1000 base pair pieces of DNA. After the Southern transfer, these molecules will show up as a spot at 1000 base pairs. Some of the cells would contain replication origins in the 1000 base pair region. After cutting with the restriction enzyme, these molecules not only would possess a mass larger than the 1000 base pair molecules, but also they would be more asymmetric. The extreme of asymmetry would occur in those molecules in which the replication origin was 500 base pairs from the end. These would generate the peak shown in Fig.1 . Those molecules for which the replication origin was nearly at the right end would, again, be like simple DNA molecules, but molecules 2000 base pairs long. Thus, the collection of molecular species would generate the arc shown upon two-dimensional electrophoresis.

 

Fig1. The various structures resulting from a replication fork entering the 1 kb region from the left. The arc shown indicates the positions of the various structures after 2D electrophoresis.

If the region of DNA we are considering contains a replication origin, quite a different pattern is generated. Suppose the origin is exactly in the middle of the region. Then the various replication forms are as shown in Fig. 3.20 and the pattern that will be found after Southern transfer is as shown. It is left as a problem to deduce the pattern expected if the origin is located to one side of the center of the DNA segment.

EN

تصفح الموقع بالشكل العمودي