النبات
مواضيع عامة في علم النبات
الجذور - السيقان - الأوراق
النباتات الوعائية واللاوعائية
البذور (مغطاة البذور - عاريات البذور)
الطحالب
النباتات الطبية
الحيوان
مواضيع عامة في علم الحيوان
علم التشريح
التنوع الإحيائي
البايلوجيا الخلوية
الأحياء المجهرية
البكتيريا
الفطريات
الطفيليات
الفايروسات
علم الأمراض
الاورام
الامراض الوراثية
الامراض المناعية
الامراض المدارية
اضطرابات الدورة الدموية
مواضيع عامة في علم الامراض
الحشرات
التقانة الإحيائية
مواضيع عامة في التقانة الإحيائية
التقنية الحيوية المكروبية
التقنية الحيوية والميكروبات
الفعاليات الحيوية
وراثة الاحياء المجهرية
تصنيف الاحياء المجهرية
الاحياء المجهرية في الطبيعة
أيض الاجهاد
التقنية الحيوية والبيئة
التقنية الحيوية والطب
التقنية الحيوية والزراعة
التقنية الحيوية والصناعة
التقنية الحيوية والطاقة
البحار والطحالب الصغيرة
عزل البروتين
هندسة الجينات
التقنية الحياتية النانوية
مفاهيم التقنية الحيوية النانوية
التراكيب النانوية والمجاهر المستخدمة في رؤيتها
تصنيع وتخليق المواد النانوية
تطبيقات التقنية النانوية والحيوية النانوية
الرقائق والمتحسسات الحيوية
المصفوفات المجهرية وحاسوب الدنا
اللقاحات
البيئة والتلوث
علم الأجنة
اعضاء التكاثر وتشكل الاعراس
الاخصاب
التشطر
العصيبة وتشكل الجسيدات
تشكل اللواحق الجنينية
تكون المعيدة وظهور الطبقات الجنينية
مقدمة لعلم الاجنة
الأحياء الجزيئي
مواضيع عامة في الاحياء الجزيئي
علم وظائف الأعضاء
الغدد
مواضيع عامة في الغدد
الغدد الصم و هرموناتها
الجسم تحت السريري
الغدة النخامية
الغدة الكظرية
الغدة التناسلية
الغدة الدرقية والجار الدرقية
الغدة البنكرياسية
الغدة الصنوبرية
مواضيع عامة في علم وظائف الاعضاء
الخلية الحيوانية
الجهاز العصبي
أعضاء الحس
الجهاز العضلي
السوائل الجسمية
الجهاز الدوري والليمف
الجهاز التنفسي
الجهاز الهضمي
الجهاز البولي
المضادات الحيوية
مواضيع عامة في المضادات الحيوية
مضادات البكتيريا
مضادات الفطريات
مضادات الطفيليات
مضادات الفايروسات
علم الخلية
الوراثة
الأحياء العامة
المناعة
التحليلات المرضية
الكيمياء الحيوية
مواضيع متنوعة أخرى
الانزيمات
A Phage Vector for Bacteria
المؤلف:
Robert Schleif
المصدر:
Genetics and Molecular Biology
الجزء والصفحة:
2nd Edition , p278-279
2025-01-08
264
Phage vectors and phage-derived vectors are useful for three reasons. Phage can carry larger inserted DNA fragments than plasmids. There fore substantially fewer transformed candidates must be examined to find a desired clone. The efficiency of infecting repackaged phage DNA into cells is considerably greater than the efficiency of transforming plasmid DNA into cells. This is an important factor when a rare clone is being sought. Finally, lambda phage permits a convenient method for screening to detect the clone carrying the desired gene. Once a desired segment of DNA has been cloned on a phage, however, the convenience of manipulating plasmids, due in part to their smaller size, dictates that the segment be subcloned to a plasmid.
Lambda was an ideal choice for a phage vector because it is well understood and easy to work with. Most importantly, the phage contains a sizable nonessential internal region flanked by EcoRI cleavage sites. Therefore this nonessential region could be removed and foreign DNA inserted. Before EcoRI- cleaved lambda DNA could be used for cloning, it was necessary to eliminate additional cleavage sites that are located in essential regions of the lambda genome. First, a lambda hybrid phage was constructed by in vivo genetic recombination. This lacked the three EcoRI cleavage sites at 0.438, 0.538, and 0.654 in the nonessential region but retained the two sites in the essential regions. Then the two remaining EcoRI cleavage sites were eliminated by mutation and selection. In the selection the phage were cycled between hosts lacking and containing the EcoRI restriction-modification systems. Any phage with cleavage sites mutated so as to be nonrecognizable by the EcoRI system would have a greater probability of escaping the restriction enzymes upon growth in the second host. After 10 to 20 cycles of this selection scheme, Davis found a phage that had lost one of the two R1 sites, and after an additional 9 to 10 cycles, he found a mutant that had lost the other site. This mutant phage was then made into a useful cloning vector by recombination with wild-type lambda to restore the three EcoRI cleavage sites located in the central portion of the genome. The DNA isolated from lambda phage particles is linear and it can be cleaved by EcoRI to yield the smaller central fragments and the larger left and right arms. EcoRI-cleaved DNA fragments to be cloned can then be hybridized together and ligated to purified right and left arms. This DNA either can be used as it is to transfect cells made competent for its uptake or it can be packaged in vitro into phage heads and used to infect cells. The efficiency, per DNA molecule, of packaging and infection is much higher than transfecting with bare DNA. Therefore packaging is used when the fragment to be cloned is present in only a few copies.