x

هدف البحث

بحث في العناوين

بحث في المحتوى

بحث في اسماء الكتب

بحث في اسماء المؤلفين

اختر القسم

القرآن الكريم
الفقه واصوله
العقائد الاسلامية
سيرة الرسول وآله
علم الرجال والحديث
الأخلاق والأدعية
اللغة العربية وعلومها
الأدب العربي
الأسرة والمجتمع
التاريخ
الجغرافية
الادارة والاقتصاد
القانون
الزراعة
علم الفيزياء
علم الكيمياء
علم الأحياء
الرياضيات
الهندسة المدنية
الأعلام
اللغة الأنكليزية

موافق

علم الكيمياء

تاريخ الكيمياء والعلماء المشاهير

التحاضير والتجارب الكيميائية

المخاطر والوقاية في الكيمياء

اخرى

مقالات متنوعة في علم الكيمياء

كيمياء عامة

الكيمياء التحليلية

مواضيع عامة في الكيمياء التحليلية

التحليل النوعي والكمي

التحليل الآلي (الطيفي)

طرق الفصل والتنقية

الكيمياء الحياتية

مواضيع عامة في الكيمياء الحياتية

الكاربوهيدرات

الاحماض الامينية والبروتينات

الانزيمات

الدهون

الاحماض النووية

الفيتامينات والمرافقات الانزيمية

الهرمونات

الكيمياء العضوية

مواضيع عامة في الكيمياء العضوية

الهايدروكاربونات

المركبات الوسطية وميكانيكيات التفاعلات العضوية

التشخيص العضوي

تجارب وتفاعلات في الكيمياء العضوية

الكيمياء الفيزيائية

مواضيع عامة في الكيمياء الفيزيائية

الكيمياء الحرارية

حركية التفاعلات الكيميائية

كيمياء الكم

الكيمياء الكهربائية

الكيمياء اللاعضوية

مواضيع عامة في الكيمياء اللاعضوية

الجدول الدوري وخواص العناصر

نظريات التآصر الكيميائي

كيمياء العناصر الانتقالية ومركباتها المعقدة

مواضيع اخرى في الكيمياء

كيمياء النانو

الكيمياء السريرية

الكيمياء الطبية والدوائية

كيمياء الاغذية والنواتج الطبيعية

الكيمياء الجنائية

الكيمياء الصناعية

البترو كيمياويات

الكيمياء الخضراء

كيمياء البيئة

كيمياء البوليمرات

مواضيع عامة في الكيمياء الصناعية

الكيمياء الاشعاعية والنووية

تحدد الطرائق الفيزيائية الوزن الجزيئي والبنية الرابعية

المؤلف:  د. روبرت موراي وآخرون

المصدر:  هاربرز في الكيمياء الحيوية

الجزء والصفحة:  ص 169

13-5-2021

1290

 تحدد الطرائق الفيزيائية الوزن الجزيئي والبنية الرابعية

يتضمن تحديد البنية الرابعية للبروتينات قليلة المواحيد (قليلة الوحدات او المونمرات اي منخفضة الوزن الجزيئي) تحديد عدد المواحيد ونوعها وتوجهها والتآثرات فيما بينها. وإذا افترضنا أن قليل المواحيد لا يتمسخ خلال الطرائق المستخدمة لتحديد الأوزان الجزيئية، فإن هناك العديد من الطرائق التي تعطي معلومات حول الوزن الجزيئي، ويمكن استخدام هذه الطرائق لتحديد الوزن الجزيئي لوحيدة فقط إذا جرى تمسخ قليل المواحيد أولا:

1     - التنبيذ الفائق التحليلي (Analytical ultracentrifugation): طور سفيدبرج هذه الطريقة التي تمكننا من قياس معدل ترسب البروتين في حقل جاذبية يبلغ نحو 105 X ج (وحدة تسارع (g) تعبر عن التسارع الناجم عن جاذبية الأرض على مستوى سطح البحر: 1 ج = 9.80665 متر/ثا2). هذه التقنية ممتازة في مجال تحديد الوزن الجزيئي لكن طرائق أخرى أقل تعقيداً حلت مكانها في السنوات الأخيرة.

2     - التنبيذ في تدرج كثافة السكروز Sucrose density gradient centrifugation: أفضل ما تطبق هذه الطريقة على البروتينات الكروية بحيث توضع البروتينات المعيارية (Standards) والمجاهيل بشكل طبقات على مدروج مدروء (Buffered) من السكروز 5-20 % يحضر بالتجميد والصهر المتكرر للسكروز ذي التركيز 20 % وبعد التنبيذ طوال الليل تؤخذ محتويات الأنبوب قطرة قطرة وتحلل بحثاً عن البروتين. ويجري حساب مدى حركية البروتين المجهول نسبة إلى حركية البروتينات المعيارية ذات الأوزان الجزيئية المعروفة ثم حديد وزنه الجزيئي.

3     - الترشيح الهلامي: تستخدم بروتينات معيارية ذات أوزان جزيئية معروفة

لتعيير (Calibration) أعمدة (Columns) من السيفادكس أو أي أطوار ثابتة (Matricesأخرى مشابهة تحوي مسامات (Pores) مجالات أبعادها معروفة؛ ثم حسب الأوزان الجزيئية للبروتينات المجهولة من موضع شطفها (Elution) نسبة لتلك البروتينات المعيارية. وقد حصل أخطاء كبيرة إذا كان البروتين غير متناظر أو يتآثر بقوة مع المادة التي صنع منها المنخل الجزيئي.

4     - الرحلان الكهربي على هلامة عديد الأكريلاميد (PAGE) : يجري فصل البروتينات المجهولة والمعيارية بالرحلان الكهربي على هلامات من الأكريلاميد المتصالب (5-15 %) ذات مسامات مختلفة الأبعاد يجري تلوينها لاحقاً لكشف البروتين باستعمال ملون ررقة كوهازي أو أيونات الفضة. وتستخدم تقنية SDS-PAGE لتحديد حجم وحيدات البروتينات قليلة المواحيد. وللقيام بذلك يجري أولا تسيخ البروتين بغليه بوجود بيتنا - مركبتو الإيثانول -mercaptoethanolβ والمنظف (Detergent) الأيوني المشحون سلبيا SDS، فتصبح البروتينات المتمسخة مغلفة بمركب SDS (أي أن شحنتها كلها سلبية) مما يسمح بفصلها على الهلامات الحاوية على SDS اعتماداً على حجمها فقط (وليس على شحنتها).

5     - يظهر المجهر الإلكتروني المركبات كبيرة الجزيئات Macromolecular complexes: يستطيع المجهر الإلكتروني التكبير حتى 100,000 مرة فيوضح لنا أجزاء الفيروسات والمعقدات الإنزيمية والبروتينات قليلة المواحيد وقليلات المواحيد ذات الوزن الجزيئي المرتفع.
  

 شعار المرجع الالكتروني للمعلوماتية




البريد الألكتروني :
info@almerja.com
الدعم الفني :
9647733339172+